?作者：张苏琳 吴莉
?单位：江苏省食品药品监督管理局认证审评中心 （江苏 南京 210002）
内容提要：稳定性研究是贯穿体外诊断试剂研究和上市及上市后研究的重要实验依据，是体外诊断试剂储存条件、有效期的确定和生产工艺、组分㊣配方选择及产品技术要求制定的研究基础。因此，科学合理地开展稳定性研究工作是体外诊断试剂研发过程中的重要内容。
关 键 词：?体外诊断试剂 稳定性研究
? ? ? ? 体外诊断试剂稳定性研究△是制定体外诊断试剂产品储存条件和有效期的〒重要依据，它影响了体外诊断试剂产←品组成、生产工艺和产品外包装材料的选择等环节，同时◣也影响了体外诊断试剂产品技术要求中各性能指标的确定。2014年9 月5 日， 年第44 号）》，公告的附件3 中规定“稳定性研究资◇料包括至少三批样品在实际储存条件下保存至↑成品有效期后的实时稳定性研究资料，并应当充分考虑产品在储存、运输和使用过程中的不利条件，进行相应的稳定性研究。应当详细说明◥稳定性研究╲方法的确定依据及∩具体试验方法、过程”。上述规定作为体外诊断试剂产品注册资料中稳定性研究部分的审评依据，规定了稳定♂性研究的类型、批次和研究条件等，但并未就具体研究内容进行详细规定，现参考《生物制品稳定性研究技术指导原则（试行）》和美国临床和实验室标准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）发布的指南性文件EP25-A，介绍☆体外诊断试剂产品稳定性研究的基本内容及注意事项。
1.开展体外诊☉断试剂稳定性研究的目的
? ? ? ? 体外诊断试剂根据组成结构和反应原理等可分为不同类别，各类别产品组◆成成分也比较复杂，许多体外诊断试剂本身就是生物◣试剂。一些体外诊断试剂组成成分的活性基团会有不同的化学不稳定性趋向，容〓易发生水解、酶解和氧化等反应，从而影响到↑试剂的质量和稳定性。如含有多肽类的冻干粉试剂，其储存环境中的含水量和含氧量对试剂稳定性的影响非常大。因此体外诊断试剂稳定↘性研究的目的是为了了解体外诊断试剂成品在各种因素影响下质量变化情⌒况。影响体外诊断试剂质量的因素包括温度、湿度、振动、氧化和光照等[1]。根据※稳定性研究结果，企业可以确定体外诊√断试剂产品的储存条件、检验周期和产品有效期等。
2.国内体外诊断试剂稳定性研究现状
? ? ? ? 目前大部分企业在研发㊣ 过程中已开始重视稳定性研究内容，但有些企业在产品注册∑ 过程中提交的稳定性研究资料中仍然存在许多问题。如：①企业将研究重点放在ζ 效期稳定性和加速稳定性研究上，忽视了●产品开封稳定性、运输稳定性和试剂中所含质控品、校准品稳定★性的研究；②企业对产品稳定性考察项目不同，有的企业只考察试剂最后的化学、生物性能是否△符合要求，而有的企业则增加了对试剂物理ξ性能的考察，如外观、装量、移行◇速度等；③效期稳〓定性研究中，有的企业〖是研究在规定储存条件下保存至有效期末的产品，有的企业是研究在规定储存条件下保存至有效期后1、2 个月乃至半年的产品；④在对产品运输稳定性项目的研ξ 究中，相同品种在不同生产企业的研究项目中模拟运输条件差别很大；⑤产品含校准♀品、质控品的稳定性研究中，有的企业只考察了校准品、质控品的“准确度”项目，而忽视了“均一性”等项目的◥考察；⑥在制定产品有效期时，大部分企业依据的是产品效期稳定性研究资料，少部分企业依据的是产品加速稳定性研究资料；⑦仅进行了一批产品的稳定∴性研究工作，未按法规要求进行三批产品的稳定性实验；⑧部分企业因实际生产样品在注册申报时留样时▓限较短，故采用前期实验室研发过程中的样品代替实际生产样品来考察产品稳定性；⑨稳定性研究实验结【果的描述过于笼统，如使用“CV值小于10%”“符合产品技术要求规定”等语句表√示，应根据》实测结果提供具体检测数据[2]；⑩只提供稳定性考察期末的研究数据，未提供稳定性考察过程中不同时间段的稳Ψ 定性研究数据；k不同企业对同一类产品的有效期要求不一致，如糖化血红蛋白检测类产品的有效期6~36个月不等。
3.稳定性研究的方案
? ? ? ? 开展稳定性研究前应先制定稳定性研究方案。稳定性研究方案一般包括研究目的、研究材料、研究项目、研究▅方法及结果分析等内容。
3.1 稳定性研究的目的
? ? ? ? 稳定☆性研究的目的包括：①确定产品的运输、储存和开封后的保存条件；②确定产品的保存期限和开封卐后保存期限；③产品储存条件和保存期限等╱发生变更时，验证变更后的产品稳定性[3]；④根据稳定性研╱究结果，评价和调整产品组∞方、工艺、包装材料等。如某〗体外诊断试剂产品稳定性研究目的：为考察试剂盒的稳定性，对三批产品进行储存温度2~8?C 的稳定性试↙验、37?C 的加速稳定性ζ 试验、2~8?C 的开瓶稳定性试验、模拟运输稳定性试验等，根据试验结果确定产品的有效期、开封有效期并确定试剂盒的运输条件。
3.2 稳定性研究的材料
? ? ? ? 稳定性研究的』材料包括试验仪器、试验试剂（三批）、校准品、质控品等。稳定性研究中的试验仪器」应为产品的适用机型。除试验○仪器外，稳定性研究中还会用到恒温箱、 ? 冷藏柜、恒湿箱等仪器，上述仪器应定期检查，防止因为仪器的故障导致稳定性试验失败。试验试剂应为▓实际生产条件下的三批试剂，并分︽别说明三个批次的批号，三个批次的生产工艺与质量要求均应保︾持一致。试剂的包装材料应与实际储存采用的包装材料一致。质控品、校准品等应符合〗产品技术要求中的相关要求。
3.3 稳定性研究的项目∏
? ? ? ? 稳定□性研究的项目应根据产品组成和方法学原理来选择评价产品质量和¤有效性的项目。一般选择产品技术要求中规定的项目，如最低◤检测限、准确性、重复性、线性范围、特异性、阴/ 阳性参考品符合率等。如果稳定性研究结果出现不符合研究方案中确定的评价指标的情况时，应进一步分析◣原因。导致产品不稳定的原因可能是组分不稳定、包装材料破损或者储存、运输条件变化等因素，企业应在确定原因后采取改进措施，并◣在改进之后对产品重新进行稳定性研究。
4.稳定性研究╲方法
4.1 效期稳定性◣评价
? ? ? ? 效期稳定性评价即实时稳定性评价，是将体外诊断试剂置于制造商规定的条件下建立或验证试剂保存期的试验。根据生物制品稳定性研究技术指导原则要求，生物制品效期稳定性研究时间设定一般原↑则是“第一年内每№隔三个月检测一次，第二年内每隔六个月检测一次，第三年开始可以每年检测一次。如果有效期为一年或一年以内，则长期稳定性应为前三个月每月检测一次，以后每〖三个月一次”。体外诊断试剂可根据产品具体情卐况来确定考察时间，对于产品性『能可能会发生变化的时段应进行密集检测。体外诊断试剂产品提交注册申请前的注册检验和临床试验时间可以一并计入产品稳定性研究时限中。
? ? ? ? ?如某体外诊断试剂（效期稳定性定为⌒ 1 年）稳定性研究方法为将三个批号的↑试剂盒放入2~8?C的冷藏柜中，自放置之日起分别在0、1、2、3、6、9、12、13 个月时各取原装未开封试剂，参考产品技术要求中相关检测方法对□ 产品进行检测，各指标均应符合拟定⌒的技术要求中各☆性能指标要求≡。
4.2 加速稳定性评价
? ? ? ? 加速稳定性评价是通过设定温度、湿度、光或振动等极端条件考察体外诊断试剂的产品各项物♀理、化学、生物性能，从而推断体外诊断试剂有效期的研究。由于大部分诊断试剂中主要组分为蛋白类〗物质，在进行加速稳◤定性研究中，升高温度来考察试剂稳定性成为常用的方式，通常是在长期稳定性◥研究温度条件下至少升高15?C。如某试剂（效期稳定性定为1 年）加速稳定性研究方法♀为：将三个⊙批号的试剂盒放入37?C恒温培养箱中，分别于第0、3、6、10 天各取原装未开封试剂，参考产品技术要求中相关检测方法对产品进行检☆测，各指标均应符合拟∮定的技术要求中各☆性能指标要求。
? ? ? ? 目前，有企业认为，试剂在37?C 放置3d 相当于4?C 放置半年，37?C放置7d 相当于4?C放置1 年，还有企业ぷ认为半年的加速稳定性研究后可①以将产品效期稳定性定为2 年，这些说法是缺乏科学依据的。由于体㊣外诊断试剂结构组成比较复杂，可能同时存在多种降解途径，不同条件下的降解、聚合、变性、失活，以及与包装材料之间的相互作】用等各不相同，所以一般情况♀下，加速稳定性研究只能用于产品一般性能研究，不能用于推导产品有效期。
4.3 运输稳定性评价
? ? ? ? ?运输稳定性评价是基于对试剂实际运输№条件的了解（如运输时间、预计温度和湿◤度）来模拟运输条件存放产品从而评价产品的稳定性。运输稳定性的研究应遵守目前监管部门对体外诊断试剂冷链运输管理的有关法规要求。在运输稳定性考察中主要考虑的条件有：极端温度条╱件，温度循〖环条件，冲击与振荡，压力与湿度等[4]。生产企业可以通过实地追踪记录体外诊断试剂产品的物流运输情况为模拟运输模式的确定提』供参考。
? ? ? ? 如某检测试剂盒模拟运输稳定性研究方法为，将三批试剂盒放在高温37?C时存放3d，再从1.5m高度，让试剂盒自由落体跌落，反复3 次，进行⌒ 震荡跌落试验，观察试剂盒外包装、内包装等＠ 有无破损后，参考产品技术要求中相关检测方法对产品＠进行检测，各指标均应符合∏拟定的技术要求中各性能指标要求。
4.4 开封稳定性
? ? ? ? ?即开瓶稳定性，是考察试剂在正常使用条件下，外界因素对试剂性能指标的影响。由于试剂、试纸条等在开〓封后会与空气接触产生氧化、降解等反ω应，部●分试剂在开瓶上机后
的外界条件与原储存条件〗差别很大，以及部分试剂还会存在使用者二次配制等情况，所以在制定开封稳定性研究方法时≡应充分考虑到各种环境因素[3]。如果试剂中含有碱¤性物质时，开瓶后长期放在生化♂分析仪中，空气中的二氧化碳会与试剂中的碱性成分反应，从而影响检测结果的准确度。因此对上述试剂，每次使用之后应盖▲紧瓶盖，避免※接触空气。生化分析仪的试剂盘的温度范围一般为5~15?C，因此，当试剂中含有对温度敏♀感的组分时，试剂使用▂后应立刻放回2~8?C冰箱中储存，并尽快▂使用。通常试剂开瓶7d 后，检测前应重新校准，以提高检▓测结果的准确度[5]。
? ? ? ? 如某试剂盒开封稳定性研方法为】：开启三个批号的试剂盒放入2~8?C 的冷藏柜中保存30d，自放置之日起分别在0、15、30、45d 时取样，每次取样后拧紧瓶盖并放回2~8?C
保存，参考产品技々术要求中的线性、准确度、精密度、最低检测限等检测方法对产品进」行检测，各指标均应符合拟定的技术要求中各性能指标要求。
5.稳定性研究结果分析◥
? ? ? ? 稳定性研究是体外诊断试剂产品质量评价ξ 的重要部分，稳定性研究结果应符合稳定性研究方案中设定的结果可接受范围。企业应对不同批次的产品的研究结果进行一致█性分析，以验证产品是否存在批间差异。同时应在考察期末对同一批次产品在不同时期的检测结果进行变异分析，考察其性能随时间下降的趋势，最后根据研究方案中】设定的可接受结果范围确□定产品的储存条件和有效期。
来源：中国医疗器械信息
整理：致众TACRO
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